La presencia de bacterias y micoplasmas asociados al BRD se evidencia mediante cultivo y/o qPCR (Real-Time Polymerase Chain Reaction). Los virus se detectan mediante qPCR ya que solo se busca evidenciar su presencia. Las pruebas histológicas como la anatomía patológica, la inmunohistoquímica y la hibridación in situ son menos habituales, aunque pueden ser complementarias a los demás métodos, en la medida en que las muestras se obtengan y preserven en condiciones óptimas (frescas y fijadas en formol).
El cultivo bacteriano (CB) es un método ampliamente utilizado para el diagnóstico de BRD, ya que permite la obtención de las bacterias, su identificación y la realización de antibiogramas. Sin embargo, el CB requiere de tiempo (días) para obtener resultados y estos dependen de la calidad de la muestra (autolisis, heterolisis). Algunas bacterias del BRD crecen tras 24 horas de su siembra (M. haemolytica, P. multocida), mientras que otras no llegan a crecer en condiciones estándar (requieren medios de cultivo y condiciones especiales) o tardan en crecer 3-5 días después de pases sucesivos del cultivo original (H. somni, Mycoplasma bovis) 4. En conjunto, todos estos factores retrasan la obtención de resultados y el inicio del tratamiento. Estas desventajas son compartidas, aunque en diferente contexto, con la histopatología, la cual brinda información detallada sobre los cambios tisulares causados por el BRD, como inflamación, necrosis, fibrosis u otros patrones histológicos característicos, pero se ve muy afectada por la calidad de la muestra y requiere tiempo para su ejecución.
El fundamento de la qPCR es homologable al del “fotocopiado” de un documento original. Si la qPCR detecta en la muestra moléculas de ADN/ARN del patógeno, emplea estas moléculas como “molde” y las copia billones de veces hasta hacerlas detectables. Esto hace que sea un método rápido, muy sensible y específico. La qPCR no depende de que el microrganismo esté vivo (viable) para ser detectado, y se ve menos afectada por la calidad de la muestra que el CB o la histopatología. Por otra parte, la qPCR se realiza inmediatamente después de la llegada de la muestra al laboratorio. Una misma muestra, como es el caso de las FTA de tejidos o secreciones, permite detectar varios patógenos simultáneamente, al poderse realizar en formato multiplex (un tubo varias PCR) 5. La qPCR es hoy día el método de elección para el diagnóstico y la monitorización del BRD.
Autor: Jaime Maldonado, DVM, MSc, ECPHM Diplomate. Senior Manager, Scientific Manager Unit (HIPRA)
Referencias:
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